SCCA-Lisa XG004
SCCA檢測及量化的ELISA試劑盒
鱗狀細(xì)胞癌抗原（SCCA）是一種腫瘤細(xì)胞相關(guān)抗原，可作為很多種鱗狀細(xì)胞癌的血清學(xué)及組織學(xué)標(biāo)記。SCCA是卵清蛋白家族成員之一，具有Ser（絲氨酸）蛋白酶抑制劑作用?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)血液中SCCA蛋白的水平與一些臨床晚期鱗狀細(xì)胞癌（包括宮頸癌、肺癌、食道癌、腦頸部逆轉(zhuǎn)乳頭狀瘤）具有很大的相關(guān)性，因而可以作為一種生物學(xué)標(biāo)志物（Ref1,2）。另外，已報(bào)道，用免疫組化技術(shù)檢測時，SCCA蛋白（SCCA1、SCCA2及SCCA-PD）在85％的肝細(xì)胞癌（HCC）患者的肝臟中超常表達(dá)（Ref3,4）。
對子宮頸鱗狀細(xì)胞癌的臨床研究顯示了在腫瘤發(fā)生過程中游離SCCA水平上升的患者比例，從Stage 0的12％到Stage IV的90％。腫瘤切除后游離SCCA水平下降，但是病情復(fù)發(fā)后90％的患者該抗原的水平重又升高。此外，檢測療后SCCA的水平還有助于監(jiān)控病人的治療效果、預(yù)測腫瘤的復(fù)發(fā)及病灶的轉(zhuǎn)移（Ref 6）。
SCCA-Lisa是一種靈敏、特異、標(biāo)準(zhǔn)化的Elisa試劑盒，可對組織/細(xì)胞的培養(yǎng)液、組織或細(xì)胞的蛋白提取物、及血漿或血清樣品中的SCCA（SCCA1、SCCA2及SCCA-PD）蛋白進(jìn)行體外檢測及量化分析（Ref 7）。
基本原理：
SCCA的檢測通過與包被在微量滴定板上的捕獲抗體的結(jié)合而實(shí)現(xiàn)（雙抗體夾心法）。在 微滴定孔板上包被第一抗體，洗去未結(jié)合的蛋白，加入SCCA使之發(fā)生抗原抗體特異性結(jié)合后，加入生物素標(biāo)記的第二抗體，再加入辣根過氧化酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，最后加入過氧化物酶底物進(jìn)行顯色反應(yīng)。由于捕獲抗體及檢測二抗的濃度跟SCCA的結(jié)合是一定的，反應(yīng)孔中的光吸收值代表了SCCA抗原的濃度。
說明書：
提供的試劑及用品：
多條帶檢測板: 96孔板上用親和純化的兔抗SCCA抗體預(yù)包被
標(biāo)準(zhǔn)液：重組人SCCA封閉液：含100 ng/mL BSA的PBS（1％的BSA）
第二抗體：親和純化的兔anti-SCCA的生物素標(biāo)記的IgG（溶解于PBS中，濃度為200 μg/mL ）。
需自備的實(shí)驗(yàn)材料：
稀釋液：PBS buffer-1%BSA(W/V)0.05%Tween(v/v) (PBS-S-T)
清洗緩沖液：
HRP-鏈霉親和素：辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素
過氧化物酶底物：ABTS
微孔板清洗儀及ELISA檢測儀
SCCA-Lisa 試劑盒的多條帶檢測板
簡要使用說明：
樣品：分別在96孔板的每孔中加入100 μl稀釋后的樣品（濃度分別為10ng/mL, 5ng/mL, 2,5ng/mL, 1,25ng/mL, 0.31ng/mL, 0.16ng/mL），孵育1小時后用清洗緩沖液洗6次
第二抗體：用PBS-S-T稀釋生物素標(biāo)記的二抗至終濃度5μg/mL，每孔加100μL，室溫下孵育1小時，用清洗緩沖液洗6次
HRP-鏈霉親和素溶液：用稀釋緩沖液以1:3000稀釋后每孔加入100 μL，室溫下孵育1h，洗6次
ABTS底物：每孔加入200 μL新鮮配制的ABTS底物溶液，置于暗處，室溫下顯色10-15分鐘，酶標(biāo)儀上405nm處測其吸光值OD。在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找到相應(yīng)的濃度值。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖Fig.1所示。
參考文獻(xiàn)：
1. Uemura Y et al, Int J Cancer, 89:368-377(2000)
2. Cataltepe S et al, Clin Chem Acta, 295:107-127(2000)
3. Ruvoletto MG et al, J Hepatology, 36: 83(2002)
4. Pontisso P et al, Brit J Cancer, 90(4):833-837 (2004)
5. Duk JM et al, Gynecol Oncol, 39:186-194(1990)
6. Lara PC et al, Cancer, 76:758-764 (1995)
7. Quarta S et al, Digestive and Liver Disease,36:A19 (2004)
Fig.1 與底物孵育15分鐘后SCCA標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍
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