酶的提取，分離純化
（一）細(xì)胞破碎處理
許多酶都存在于細(xì)胞內(nèi)。為了提取這些胞內(nèi)酶，首先需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破碎處理。細(xì)胞破碎的方法很多，主要包括機(jī)械破碎法、物理破碎法、化學(xué)破碎法和酶學(xué)破碎法等。機(jī)械破碎法是指利用搗碎機(jī)、研磨器或勻漿器等將細(xì)胞破碎。物理破碎法是指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細(xì)胞破碎。化學(xué)破碎法是指利用甲醛、丙酮等有機(jī)溶劑或表面活性劑作用于細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞或透性發(fā)生改變。酶學(xué)破碎法是指選用合適的酶，使細(xì)胞壁遭到破壞，進(jìn)而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎。
（二）提取
酶的提取是指在一定條件下，用適當(dāng)?shù)娜軇┨幚砑?xì)胞破碎后的含酶原料，使酶充分地溶解到提取液中的過(guò)程。酶的提取方法有過(guò)柱法、鹽溶液提取法、堿溶液提取法和有機(jī)溶劑提取法等。為了提高酶的提取率和防止酶提取后變性失活，提取過(guò)程中必須注意保持適宜的溫度和pH值，并且添加適量的保護(hù)劑。
（三）分離
提取液中含有多種酶，要想從提取液中分離純化出某一種酶，必須根據(jù)這種酶的特性，選擇合適的分離純化方法。酶分離純化的方法很多，可利用酶相對(duì)分子質(zhì)量的大小進(jìn)行分離純化，如通過(guò)透析的方法分離酶等。
酶的生產(chǎn)方法
酶的生產(chǎn)是指經(jīng)過(guò)預(yù)先設(shè)計(jì)，并且通過(guò)人工控制而獲得所需要酶的過(guò)程。概括地說(shuō)，酶的生產(chǎn)方法有提取法、發(fā)酵法和化學(xué)合成法三種。
（一）提取法
提取法是最早采用并且一直沿用至今的一種方法。提取法采用各種技術(shù)，直接從動(dòng)植物或微生物的細(xì)胞或組織中將酶提取出來(lái)。提取法雖簡(jiǎn)單易行，但必須要有充足的原材料，這就使提取法的廣泛應(yīng)用受到了限制。但是，在動(dòng)植物或微生物資源豐富的地區(qū)，提取法仍然具有應(yīng)用價(jià)值。例如，在屠宰廠，可從家畜胰臟中提取胰酶；在水果加工廠，可從菠蘿皮中提取菠蘿蛋白酶。
（二）發(fā)酵法
發(fā)酵法是20世紀(jì)50年代以來(lái)生產(chǎn)酶的主要方法。發(fā)酵法主要通過(guò)微生物發(fā)酵來(lái)獲得人們所需要的酶。發(fā)酵法一般包括固體發(fā)酵、液體深層發(fā)酵、固定化細(xì)胞發(fā)酵和原生質(zhì)體發(fā)酵等多種方式。
（三）化學(xué)合成法
化學(xué)合成法是20世紀(jì)60年代末出現(xiàn)的一種生產(chǎn)酶的技術(shù)。1969年，美國(guó)科學(xué)家首次采用化學(xué)合成的方法獲得了含有124個(gè)氨基酸的核糖核酸酶。但是，化學(xué)合成法的成本比較高，并且只能合成那些已知化學(xué)結(jié)構(gòu)的酶。所以，化學(xué)合成法目前仍然停留在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)合成的階段。 |
